کاربرد اصلی درمان با تستوسترون، جایگزینی تستوسترون در مردانی است که کمبود واقعی این هورمون دارند و این کمبود به یک وضعیت پزشکی مشخص مربوط می‌شود.

علائم کمبود تستوسترون ممکن است شامل کاهش میل جنسی، اختلال عملکرد جنسی، کاهش انرژی، کاهش توده عضلانی و برخی تغییرات خلقی باشد؛ با این حال، وجود این علائم به‌تنهایی برای شروع درمان کافی نیست.

بنابراین، تشخیص کمبود تستوسترون معمولاً با بررسی علائم و اندازه‌گیری تستوسترون خون، ترجیحاً در ساعات صبح و در بیش از یک نوبت، انجام می‌شود.